Práctica 5: Preparación de un medio de cultivo.

Objetivo:

Los objetivos de esta práctica han sido dos:

1. En primer lugar, la preparación de un medio de cultivo bacteriano.
2. En segundo lugar, el sembrado de bacterias para, posteriormente, observarlas con la lupa.

Material:

El material utilizado durante esta práctica ha sido el siguiente:

o Balanza
o Probeta 500 ml
o Agitador
o Papel indicador
o Bastoncillos de algodón
o Vasos de precipitado
o Vidrio reloj
o Placas de petri

1. Productos para la preparación del medio:

• Extracto de carne 2.5 g
• NaCl 2.5 g
• Agar-Agar 10 g
• Agua 250 ml

2. Preparación de un medio de cultivo bacteriano:

1. Fundamento teórico:
Las bacterias en la naturaleza, según sus necesidades nutricionales, ocupan distintos nichos ecológicos que satisfacen las mismas. En el laboratorio, para conseguir que una determinada especie bacteriana se desarrolle adecuadamente es necesario proporcionarle un ambiente artificial que las satisfaga igualmente. Esto se consigue mediante el uso de los llamados “medios de cultivo” Un medio de cultivo es cualquier sustancia líquida o sólida que puede utilizarse en el laboratorio para que crezcan los microorganismos. Cualquiera que sea el medio debe incluir todo lo necesario para el crecimiento, lo cual varía según el organismo que se quiere cultivar, pero que comprende: agua, compuestos nitrogenados, una fuente de energía y otros factores de crecimiento. Los requerimientos nutricionales de las bacterias varían desde los sencillos compuestos inorgánicos de las autótrofas hasta las complicadas vitaminas y factores de crecimiento de algunas heterótrofas. Algunos medios, como por ejemplo el “agar nutritivo” son capaces de soportar el crecimiento de muchas bacterias.

2. Preparación de Agar:
En primer lugar, pesamos 1.25 gramos de extracto de carne y 1.25 gramos de cloruro sódico (sal). Posteriormente, lo mezclamos en un vaso de precipitado que contenga 250 ml de agua. Tras esto, añadimos una cucharada de lactosa, que le proporcionará al medio la fuente de energía necesaria para el crecimiento de los microorganismos y, a ojo, la cantidad necesaria de agar para que la mezcla espese.
En segundo lugar, debemos mezclar la preparación, mientras ésta se calienta al baño maría, hasta que espese.
A la hora de verter la preparación en las placas de petri, es necesario hacerlo cerca de la llama de un mechero para no contaminar el medio. Finalmente, sólo nos queda esperar hasta que se enfríe.

Agar carne:
Avecrem + sal (NaCl) + lactosa + agua.

3. Sembrado de bacterias:
En primer lugar, tomamos una muestra con un bastoncillo de algodón del fondo de la garganta de un compañero, teniendo especial cuidado al retirar el bastoncillo del interior de la boca, ya que no se deben tocar las paredes de la misma. Inmediatamente, pasamos el algodón del bastoncillo por la placa de petri, que contiene la preparación de agar. Para evitar equivocaciones con las otras muestras de los compañeros, debemos indicar con una etiqueta cada muestra.
El siguiente paso, sería colocar la muestra en un calefactor que le proporcione la temperatura idónea para el crecimiento de las bacterias. Sin embargo, tuvimos el enorme inconveniente de no disponer de calefactores, ya que los nuestros se encontraban en malas condiciones. Como alternativa, las situamos en el interior de un cristalizador boca abajo. Desgraciadamente, nuestra alternativa no tuvo gran éxito y, sólo unas pocas muestras sirvieron para la observación con la lupa.

Conclusiones:

Nuestra muestra, por ejemplo, fue una de las que tuvo éxito, escaso, pero suficiente para poder observar colonias de bacterias.